去世前于1895年立下遗嘱，将其财产性大部分920万美元作为基金，以其年息(每年20万美元)设立物理、化学、生理或医学、文学以及和平事业5种奖金（1969年瑞典国家银行增设经济学奖金)，奖励当年在上述领域内作出最大贡献的学者。从1901年开始，奖金在每年诺贝尔逝世时间12月10日下午四点半颁发。
　　诺贝尔一生在死神的威胁下为人类向大自然索取动力，在讲述自己一生的科学技术成就时他只用了简短的几句话——“本文作者生于1833年10月21日，他学问从家庭教师处得来，从没有进过高等学校。他特别致力于应用化学的研究，生平所发明的炸药有：猛炸药、无烟火药、‘巴立斯梯’或称C89号，1884年加入瑞典皇家科学会、伦敦的皇家学会和巴黎的土木工程师学会。1880年得瑞典国王创议颁发的科学勋章，又得到法国大勋章。”
　　诺贝尔被国标苏教版语文第九册（五年级上册）介绍，列入课文，题为《诺贝尔》。
　　诺贝尔被北师大版语文第十二册（六年级下册）介绍，列入拓展阅读，题为《炸药工业之父----诺贝尔》。

遗嘱：

　　诺贝尔在他生命的最后几年，曾先后立下过3份内容非常相似的遗嘱。第一份立于1889年，第二份立于1893年，第3份则立于1895年，最后存放在斯德哥尔摩一家银行，也就是要以它为准的最后遗嘱。
　　这份遗嘱取消了分赠亲友的部分，将自己的全部财产用于设立奖励基金，于1897年初在瑞典公布于众：
　　签名人阿尔弗雷德·诺贝尔，在经过成熟的考虑之后，就此宣布关于我身后可能留下的财产的最后遗嘱如下：
　　“我所留下的全部可变换为现金的财产，将以下列方式予以处理：这份资本由我的执行者投资于安全的证券方面，并将构成一种基金；它的利息将每年以奖金的形式，分配给那些在前一年里曾赋予人类最大利益的人。上述利息将被平分为5份，其分配办法如下：一份给在物理方面作出最重要发现或发明的人；一份给作出过最重要的化学发现或改进的人；一份给在生理和医学领域作出过最重要发现的人；一份给在文学方面曾创作出有理想主义倾向的最杰出作品的人；一份给曾为促进国家之间的友好、为废除或裁减常备军队以及为举行和平会议作出过最大或最好工作的人。物理和化学奖金，将由瑞典皇家科学院授予；生理学和医学奖金由在斯德哥尔摩的卡罗琳医学院授予；文学奖金由在斯德哥尔摩的瑞典文学院授予；和平奖金由挪威议会选出的一个五人委员会来授予。我的明确愿望是，在颁发这些奖金的时候，对于授奖候选人的国籍丝毫不予考虑，不管他是不是斯堪的纳维亚人，只要他值得，就应该授予奖金。
　　我在此声明，这样授予奖金是我的迫切愿望。
　　这是我的唯一有效的遗嘱。在我死后，若发现以前任何有关财产处理的遗嘱，一概作废。
　　阿尔弗雷德·伯哈德·诺贝尔
　　1895年11月27日”